一、概述
Magarose-ProA（ProG、ProA/G、ProL）抗體純化磁珠系列產(chǎn)品是由NHS活化的磁性瓊脂糖微球與Protein A（or Protein G）共價結(jié)合形成的復(fù)合微粒。與當(dāng)前國際免疫磁珠市場上同類產(chǎn)品相比，該產(chǎn)品具有更高的抗體結(jié)合能力和較低的蛋白非特異吸附率，洗脫條件更均一，一步純化即可從血清樣品中分離出純度大于90%的抗體。本產(chǎn)品為微米級磁性微球，熟練操作可在15 min內(nèi)完成抗體吸附過程，30 min內(nèi)完成抗體純化流程。本產(chǎn)品可重復(fù)使用，適用于血漿、腹水、組織培養(yǎng)上清液等樣品中的抗體純化，也可用于抗體固定及其它相關(guān)研究。用戶可根據(jù)目標(biāo)抗體的種屬來源及亞型選擇磁珠的類別，Magarose-ProA（roG、ProA/G、ProL）磁珠與不同抗體的親和性比較參見http://m.5000js.com/html/4309815423.html。
二、產(chǎn)品特性
產(chǎn)品名稱
Magarose-ProA （ProG、ProA/G、ProL）
貨號
PMAG008
磁珠濃度
25% (v/v) in PBST（含0.05% NaN3）
配基密度
/
介質(zhì)
6%交聯(lián)磁性瓊脂糖
粒徑
20-45μm
配體結(jié)合
~40 mg Human IgG /ml磁珠
保存
2~8℃保存一年
注：磁珠蛋白結(jié)合量與目標(biāo)蛋白特性相關(guān)，此處僅作參考值。
三、使用方法
1. 緩沖液
Binding/Washing buffer PBST（pH 7.2~7.4）: 137 mM NaCl，2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0.1% Tween-20;
Elution buffer: 100 mM Glycine, 0.1% Tween-20, pH 2.5;
Neutrilization buffer: 1.0 M Tris-HCl, pH 9.0;
2. 操作流程 (以純化人血清IgG為例)
1) 樣品處理：取人血清100 μL至1.5 mL EP管中，接著加入900 μL Binding/Washing buffer，充分混勻。
2) 磁珠預(yù)處理：將抗體純化磁珠漩渦振蕩30 s，使磁珠充分重懸；取100 μL 10%（v/v）磁珠懸液置于另一新的1.5 mL EP管中。對磁珠懸液進(jìn)行磁性分離，棄上清液，用1 mL Binding/Washing buffer洗滌2次，磁性分離，管中磁珠可直接用于抗體分離。
注：該步驟磁珠的用量可根據(jù)磁珠對目標(biāo)抗體的最大結(jié)合量進(jìn)行調(diào)節(jié)，當(dāng)目標(biāo)抗體的濃度大于150 μg/mL時，用戶可取1.2~1.5倍磁珠用量（計算方式：如1.5*樣品中目標(biāo)抗體含量/磁珠最大結(jié)合量），若目標(biāo)抗體濃度過低，如低于70 μg/mL時，客戶為了提高抗體回收率，可增加磁珠用量，如提高至3倍磁珠用量。
3) 抗體吸附：在步驟2預(yù)處理的磁珠管中加入步驟1處理的樣品溶液，漩渦振蕩均勻，在室溫下（約25℃）置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP管，促使樣品和磁珠充分接觸并吸附，翻轉(zhuǎn)約15 min后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液。
4) 磁珠洗滌：向EP管中加入1 mL Binding/Washing buffer，振蕩重懸磁珠后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液；該操作重復(fù)3次。
5) 抗體洗脫：在上述完成磁珠洗滌的EP管中加入0.5~1.0 mL Elution buffer，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下（約25℃）置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP管，翻轉(zhuǎn)10 min后進(jìn)行磁性分離，收集上清液至新的EP管。
注：該步驟Elution buffer用量，建議客戶使最終洗脫的抗體濃度控制在0.6~1.2 mg/mL，此時第1次洗脫條件中95%以上的抗體將被洗脫下來；若Elution buffer用量過少，會導(dǎo)致部分抗體在第1次洗脫時仍然留在磁珠上，從而導(dǎo)致抗體回收率降低。
6) 抗體中和：在步驟5抗體洗脫液中加入一定量的Neutrilization buffer，一般為抗體洗脫體積的1/10，最終使洗脫的抗體pH值保持中性環(huán)境，以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。
7) 磁珠后處理：使用后的磁珠用Elution buffer洗滌2次，磁性分離，棄上清液；接著用Binding/Washing buffer洗滌3次，磁性分離，棄上清液，加入100 μL Storage buffer重懸磁珠 ，置于2~8℃保存。
3. 磁珠再生
1) 磁珠多次使用后會有沉淀蛋白、強疏水性蛋白、脂蛋白等雜質(zhì)非特異性吸附到磁珠上，為了保證磁珠的使用效率，建議持續(xù)使用5次后進(jìn)行磁珠再生處理。
2) 按每1 mL 25%（v/v） 磁珠加入2 mL 1%（v/v）Triron X-100磁珠再生緩沖液，振蕩均勻，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)混合，10 min后進(jìn)行磁性分離，棄上清液。
3) 立即加入1 mL Binding/Washing buffer進(jìn)行重懸，然后磁性分離，棄上清液，重復(fù)該操作3次。
4) 加入1 mL Storage buffer重懸磁珠，2~8℃保存。
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