【產(chǎn)品介紹】
本試劑盒是用來從葉子、種子等植物組織和植物培養(yǎng)細(xì)胞等植物樣品中快速提取和純化植物基因組DNA。本試劑盒是利用磁硅珠能吸附破碎溶液中的基因組DNA 的原理來回收DNA。無需借助苯酚等有害的試劑來進(jìn)行除蛋白操作，就能簡便地抽提出基因組DNA?；厥盏?span>DNA 可以直接用于下游進(jìn)行酶切、PCR、二代測序和基因芯片等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。本試劑盒除可與核酸自動(dòng)抽提裝置組合使用外，還可與磁分離架一起使用，作為進(jìn)行固液手動(dòng)分離的試劑盒。
【特點(diǎn)】
l 高效率：可以從葉子、種子等組織和培養(yǎng)細(xì)胞等植物樣品中抽提出高純度的基因組DNA。
l 簡便/短時(shí)間：利用磁硅珠對(duì)基因組DNA 的吸附性，能簡便地在短時(shí)間內(nèi)抽提出基因組DNA。
l 可進(jìn)行高純度的DNA 抽提： 本試劑盒抽提的基因組DNA，幾乎不含RNA 和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，可直接用于PCR 等的酶反應(yīng)。
【保存方法及注意事項(xiàng)】
1) 裂解液低溫儲(chǔ)存可能會(huì)出現(xiàn)白色絮狀漂浮物，在使用前65℃預(yù)熱至白色絮狀物完全溶解，不影響使用效果。
2）磁珠使用前要充分混勻。
3）如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì)RNA污染比較敏感，可在裂解時(shí)加入1ul 的RNaseA （10mg/ml）。
4）如果是干材料，適當(dāng)延長裂解時(shí)間，種子用粉碎機(jī)打成粉末狀使用，樣品為種子時(shí)，裂解時(shí)間為30min。
5）如果同等取樣量下欲得到更多DNA可增加洗脫次數(shù)（洗脫次數(shù)最好不要超過3次），也可適當(dāng)延長裂解時(shí)間。
【試劑盒組成】
組分
100次
保存
Lysis Buffer
50 ml
常溫
PuriMag bead
2 ml
2-8℃
Wash buffer
75%乙醇（用戶自備）
Elution buffer
5 ml
RNase A
2 ml（選配試劑）
異丙醇
用戶自備
DNA濃度及純度檢測 ：（1）得到的基因組DNA片段大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中剪切力等因素有關(guān)，所得DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度和純度。 （2）DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260=1相當(dāng)于大約50ng/ul雙鏈DNA，40ng/ul單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7~1.9，如果洗脫時(shí)使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)?span>pH和離子會(huì)影響吸光度，并不表示純度低。
【操作步驟】
取材量參考下面表格：
材料
取樣量
新鮮植物葉片
50～200 mg
干葉片
10～30 mg
大豆種子
5～30 mg
小麥種子
玉米種子
以從50 mg～200 mg植物葉片中提取基因組DNA為例：
1）取新鮮植物組織或粉狀干燥組織50mg～200mg,用液氮在研缽中研磨充分，加入1ml的Lysis Buffer（65℃預(yù)熱）研磨均勻，然后轉(zhuǎn)移到1.5ml的EP管，混合均勻。
2）將EP管置于恒溫水箱中65℃溫浴30～60min，期間不時(shí)搖動(dòng)，溫浴結(jié)束后，12000rpm離心10min。
3）取200ul上清液于新的1.5ml的EP管中，加入20ul 的RNA酶混勻，5min后加入20ul的 PuriMag bead、200ul異丙醇，顛倒混勻靜置5min后,將EP管置于磁力架上磁分離，吸棄上清液。
4）移去磁力架，加入800ul的Wash Buffer，振蕩混勻靜置5min后，將EP管置于磁力架上磁分離，吸棄上清液。若有團(tuán)狀或絲狀物可增加振蕩時(shí)間及力度。重復(fù)該步驟一次。
5）移去磁力架，加入100ul的Elution Buffer，移液槍緩慢吹打混勻1~2min，將離心管在磁力架上靜置0.5min，小心吸走上清液放入新離心管即為提取的DNA，存放于2-8℃，長期存放需置于-20℃。（洗脫液在65-70 ℃中預(yù)熱后洗脫效果更好，減小洗脫體積或多次洗脫可增大DNA濃度。）
【常見問題即處理建議】
常見問題
可能的原因
建議
得率
樣品沒有研磨充分
盡量將樣品研磨充分
樣品裂解完后，沒有離心直接進(jìn)行下一步操作
如樣品裂解后，一定要離心后，再進(jìn)行下一步操作。
樣品用量過大
嚴(yán)格按說明書程序進(jìn)行
程序設(shè)置不準(zhǔn)確
條帶彌散
研磨時(shí)間太長
迅速研磨防止DNA降解
環(huán)境溫度太高
可將研缽置于-20℃預(yù)冷20min后再進(jìn)行研磨，如所提材料基因組極易降解，用液氮研磨
樣品不新鮮或樣品反復(fù)凍融多次
盡量用新鮮樣品試驗(yàn)
裂解時(shí)間太長
裂解時(shí)間不超過60min
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