1. 概述
PuriMagTM G-IA碘乙?；罨判约{米微粒是均一的、聚合物包覆的超順磁納米粒，親水表面確保磁珠在各種緩沖液中具有出色的分散性、低非特異吸附和易操作性，表面涂有高密度的碘乙?；倌軋F。磁珠粒用于共價偶聯含巰基（-SH）的配體。
PuriMagTM G-IA碘乙?；罨判约{米微粒最適合結合較大的蛋白和小肽，因為親水性接頭可以減少空間位阻。隨后，可以高度嚴格地洗滌含有共價連接的蛋白質的磁珠，實際上消除了任何非特異性結合的蛋白質。獨特的表面意味著在基于蛋白質的系統(tǒng)中低的非特異性結合，并且無需使用表面活性劑即可實現出色的處理效果。這些高結合力的磁珠適合在各種研究和診斷應用中使用，無論您是在實驗室規(guī)模還是對高通量應用有更嚴格的要求。
特點和優(yōu)點：
1）與半胱氨酸殘基共價和特異結合；
2）水不溶性配體可以在終濃度為10-30％的乙腈或二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亞砜（DMSO）的偶聯緩沖液中或在終濃度為6 M鹽酸胍的偶聯緩沖液中偶聯；
3）穩(wěn)定的共價鍵和低水平的配體泄漏；
4）產生可重復使用的免疫親和基質；
5）低非特異性結合；
6）固定1~20 mg蛋白質或0.1~2mg肽/ g磁珠
7.）應用：抗體，蛋白質/肽，DNA / RNA的純化；細胞分選，免疫沉淀
PuriMagTM碘乙酰磁珠偶聯巰基原理：
2. 產品信息
Product Specifications
Description
Polymer coated Fe3O4 nanoparticles
Particle Size
200 nm
Number of Beads
~1.7×1010 beads/mg
Matrix
Proprietary polymer
Functional group
Iodoacetyl groups
Group density
~300 μmole / g of Beads
Magnetization
60~70 EMU/g
Formulation
10mg/mL in in 1M NaCl and 0.02% NaN3
Stability
pH 3.5~10, 4~50 ℃, most organic solvents
Storage
1 year at 2~8 ℃. Do not freeze.
3. 使用方法
注意：以下方案是將蛋白或多肽與PuriMagTM G-IA碘乙?；舛说拇胖榕悸摰氖纠?。強烈建議進行滴定，以優(yōu)化用于每種單獨應用的磁珠量。該協(xié)議可相應地按比例放大和縮小。
A. 所需材料
1）磁力架（用于手動操作）：用于容納12個單獨的1.5~2ml離心管（Mrack02）；用于容納2個50 ml離心管或2個15 ml離心管（目錄號Mrack03）
2）偶聯緩沖液
可溶性配體偶聯緩沖液：50 mM Tris, 5 mM EDTA-Na, pH 8.5；
不溶性配體偶聯緩沖液：50 mM Tris, 5 mM EDTA-Na, pH 8.5, 20- 30% DMSO or DMF or 6M guanidine?HCl
3）洗滌液： 1 M sodium chloride (NaCl) in distilled H2O
4）封閉化合物L-Cysteine?HCl
5）TCEP (tris(2-carboxyethyl)phosphine)
6）Phosphate buffered saline (PBS)
B. 樣品準備
注意：
確保要結合的蛋白質/肽具有游離的（還原的）巰基。為了確保可用的巰基游離基，必須使用DTT (dithiothreitol), TCEP (tris(2-carboxyethyl)phosphine), or 2-MEA (2-Mercaptoethylamine?HCl) 等還原劑還原二硫鍵，然后進行脫鹽或透析去除還原劑。
如果重新合成后立即使用新合成的肽，則可直接用于偶聯。
對于蛋白質，在室溫下用5-10 mM TCEP溶液處理蛋白質30分鐘，然后進行透析或脫鹽柱。對于IgG抗體，建議使用2-MEA，因為其選擇性減少了鉸鏈區(qū)二硫鍵。
如果樣品中含有帶有游離巰基的還原劑（例如2-巰基乙醇、DTT或TCEP），則必須通過透析或脫鹽將其徹底去除。
1）如果可溶，將1-10mg蛋白質/肽溶解在1ml可溶性偶聯緩沖液中。如果不溶，則溶于1ml不溶性偶聯緩沖液中。
2）如果樣品已經懸浮在其他緩沖液中，請用等體積的耦合緩沖液稀釋樣品。
C. PuriMagTM磁珠的準備
1）稱重并將3 mg磁珠轉移到離心管中。通過添加100 μl偶聯緩沖液重懸磁珠，并通過劇烈渦旋1~2分鐘混合磁珠。
注意：重新水合后，由于官能團的穩(wěn)定性，應盡快使用磁珠；將一些磁珠懸浮在緩沖液中后，可能會聚集，可以通過劇烈渦旋或非常溫和的超聲處理10~30秒將其完全懸浮。
2）磁分離，除去上清液。從磁力架移出離心管，并用1 ml偶聯緩沖液渦旋懸浮磁珠30秒鐘。
3）重復步驟2一次。
D. 偶聯
1）將B1或B2中的樣品添加到洗滌過的PuriMagTM磁珠中，并在室溫下輕輕旋轉孵育30-60分鐘。
2）如C2所述，用1ml偶聯緩沖液洗滌磁珠四次。
3）通過將磁珠懸浮在1ml偶聯緩沖液中（含8mg的Cysteine?HCl的），并在室溫下溫育30-60分鐘，以封閉磁珠上多余的活性基團。
4）如C3所述，用1ml洗滌緩沖液洗滌PuriMagTM磁珠四次。
5）將磁珠重懸于含有0.05％疊氮化鈉的PBS緩沖液中，并儲存在4℃下。
E. 一般親和純化方案
注意：設計通用的純化DNA或RNA的方案相對簡單，因為核酸的生化特性相對一致。但是，設計一種通用的親和純化方案非常困難，因為每種蛋白質都有不同的組成和結構。為了獲得最佳結果，每個用戶都必須為各個應用程序確定最佳工作條件。
1）將最適量的PuriMagTM磁珠轉移到離心管中。磁分離1~3分鐘，除去上清液。
注意：強烈建議根據粗樣品中目標蛋白的量進行滴定，以優(yōu)化用于每種應用的磁珠的量。所用磁珠過多會導致較高背景，而所用磁珠太少則會導致較低產量。每mg的磁珠通常結合1~20 ug的目標蛋白。
2）取下離心管，用5倍磁珠體積的PBS緩沖液懸浮30秒。磁分離1~3分鐘，除去上清。
3）重復步驟2兩次
4）將洗滌過的PuriMagTM磁珠加入含有目標蛋白的粗樣品中，并在室溫或所需溫度下孵育1~2小時（較低的溫度需要更長的孵育時間）。
5）用5倍磁珠體積的PBS緩沖液或1M NaCl充分洗滌磁珠，直到280 nm洗脫液的吸光度接近背景水平（OD 280 <0.05）。
6）通過適當的方法洗脫目標蛋白，例如低pH（2~4）、高pH（10~12）、高鹽、高溫、親和洗脫或在SDS-PAGE上樣緩沖液中煮沸。
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