【產(chǎn)品介紹】
磁珠法質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒是普睿邁格生物科技有限公司最新研制的一種細菌質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒。本產(chǎn)品將磁性納米分離技術(shù)和細菌細胞的SDS堿裂解法結(jié)合從菌體中提取高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。在離心力的作用下細胞碎片和SDS復(fù)合物沉淀下來。在一定的條件下磁珠能很好的吸附存在于上清中的質(zhì)粒DNA，其他雜質(zhì)如蛋白質(zhì)、鹽離子等通過洗滌被除去。當條件改變時，磁珠釋放吸附的質(zhì)粒DNA。對于高拷貝質(zhì)粒，從2 ml過夜培養(yǎng)的菌液（OD600 = 2.0）中可以獲得超過15 μg的質(zhì)粒DNA。由本試劑盒抽提得到的質(zhì)粒純度高，OD260/OD280比值一般為1.7~1.9之間，OD260/OD230比值大于2.0，可直接用于轉(zhuǎn)化、DNA測序、PCR、基于PCR的突變、體外轉(zhuǎn)錄和酶切等后續(xù)實驗。
【特點】
l 對于高拷貝質(zhì)粒，從2 ml過夜培養(yǎng)菌液（OD600 = 2.0）中可獲得超過15 μg的質(zhì)粒DNA；
l 與同類產(chǎn)品相比，提取效率更高，獲得質(zhì)粒的純度更高；
l 與柱式法相比，可大大減少離心次數(shù)，獲得完整性更好的質(zhì)粒；
l 可以同時處理多個樣品，實現(xiàn)質(zhì)粒提取的高通量化和自動化。
【保存方法及注意事項】
請將試劑盒中的PuriMag Beads和RNase A置于2-8℃保存，其余試劑室溫保存，有效期詳見包裝。
l 嚴禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會對磁珠造成不可逆的損害。
l 磁珠長期放置后會聚集成團，從而使磁珠表面積減小，降低樣品回收得率，使用前一定要渦旋振蕩徹底混勻磁珠（通常需渦旋振蕩20秒）。
【試劑盒組成】
組分
100次
保存
Resuspension solution
20 ml
常溫
Lysis buffer
Neutralization solution
Wash buffer
75%乙醇（用戶自備）
Elution buffer
10 ml
PuriMag bead
2 ml
2-8℃
RNase A
異丙醇
用戶自備
DNA濃度及純度檢測 ：（1）得到的基因組DNA片段大小與樣品保存時間、操作過程中剪切力等因素有關(guān)，所得DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度和純度。 （2）DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260=1相當于大約50ng/ul雙鏈DNA，40ng/ul單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7~1.9，如果洗脫時使用去離子水，比值會偏低，因為pH和離子會影響吸光度，并不表示純度低。
【操作步驟】
分菌→
1) 取1~1.5 ml過夜培養(yǎng)的大腸桿菌于2 ml微量離心管中，4℃下9000 rpm離心0.5分鐘，盡量吸干培養(yǎng)液；
懸菌→
2) 加200 ul Resuspension solution和20ul RNaseA懸浮細菌，充分混和均勻；
裂解→
3) 加200 ul Lysis buffer，蓋緊管口，輕緩上下4-6次顛倒離心管以使溶液變透明、粘稠），室溫靜置3-5min至完全裂解。
中和→
4) 加200 ul 冰預(yù)冷的Neutralization solution，蓋緊離心管口后上下輕緩顛倒4-6次，加入50 ul異丙醇。
結(jié)合→
5) 4 ℃下13000 rpm離心5 min，小心吸取500ul上清液至新的1.5 ml離心管（300 ul異丙醇與20 ul PuriMag bead預(yù)先在離心管中混勻）；吹打3~5次，放置5 min; 將離心管放到磁力架上靜置10s，小心吸棄上清。
洗滌→
6) 向離心管中加入700 ul Wash buffer，移液槍吹打混勻，將離心管放到磁力架上靜置10 s，小心吸棄上清。重復(fù)該步驟一次。倒置離心管2~3 min，室溫晾干5 min，讓殘留乙醇揮發(fā)干凈，以免影響后續(xù)實驗。
洗脫→
7) 向離心管中加入50-100 ul Elution buffer，移液槍吹打混勻1-2 min。（Elution buffer在65-70 ℃中預(yù)熱后洗脫效果更好，減小洗脫體積或多次洗脫可增大DNA濃度）將離心管放到磁力架上靜置10 s，小心吸走上清液放入新離心管中，即為提取的質(zhì)粒DNA，可存放于2~8 ℃，長期存放需放置于-20 ℃。
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