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一、概述
環(huán)氧基磁珠PuriMag G-Epoxy是在Fe3O4磁核表面包覆GMA涂層的超順磁納米顆粒，表面具有高密度環(huán)氧基團(tuán)。環(huán)氧基磁珠可用于共價(jià)偶聯(lián)胺、巰基或含羥基的配體。含羥基、胺和巰基的配體的偶聯(lián)分別在pH 11-13、pH> 9和pH 7.5~8.5下反應(yīng)。不溶于水的配體可在50％有機(jī)溶劑（二甲基甲酰胺）中偶聯(lián)。PuriMag G-Epoxy包含短臂和長臂磁珠，都適用于蛋白質(zhì)和多肽的偶聯(lián)。
w 優(yōu)點(diǎn)：
w 預(yù)活化可隨時可用；
w 可在pH 9?12，20?40 °C，6?24 h條件下高效共價(jià)偶聯(lián)；
w 配體通過共價(jià)鍵穩(wěn)定偶聯(lián)，不會脫落；
w 較低的非特異性結(jié)合；
w 每克磁珠可固定0.4~4 mg蛋白質(zhì)或0.04~0.4 mg肽；
w 應(yīng)用：細(xì)胞分選、免疫共沉淀；抗體、蛋白質(zhì)/肽的純化，DNA / RNA
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二、產(chǎn)品特性
1. 短鏈環(huán)氧基磁珠PuriMag GS-Epoxy
(Epoxy Density>600μmol/g)
2. 長鏈環(huán)氧基磁珠PuriMag GL-Epoxy
(Epoxy Density>300μmol/g)
穩(wěn)定性： pH 4-10, Temperature of 4℃-90℃, Most organic solvents;
磁性: ~60-80 emu/g;
數(shù)量: ~4×1010 beads /mg; 密度: 3.5 g/ml
尺寸: ~ 200nm diameter; 比表面積: ~5 m2/g;
儲存：10 mg/ml in acetone at 2~8°C
三、偶聯(lián)方案
環(huán)氧基磁珠PuriMag G-Epoxy有利于小配體與磁珠的結(jié)合，包括但不限于單糖、肽和二糖。 它也可用于偶聯(lián)各種配體，如蛋白A、StrepTactin、枯草桿菌蛋白酶和免疫球蛋白。 如果配體負(fù)載量太低，可能會導(dǎo)致非特異性吸附過大；如果配體負(fù)載量過高，可能會造成空間位阻。因此，強(qiáng)烈建議優(yōu)化每個單獨(dú)應(yīng)用的磁珠用量。推薦用量一般為0.04~0.4 mg多肽/ mg磁珠。 以下實(shí)驗(yàn)方案可相應(yīng)放大和縮小。
A. 緩沖液
1) 偶聯(lián)緩沖液（Coupling Buffer）: 0.1 M sodium carbonate buffer or 0.1 M sodium phosphate, pH 8.5-10;
注意：緩沖液的離子強(qiáng)度對于獲得更高的偶聯(lián)效率至關(guān)重要。 偶聯(lián)緩沖液應(yīng)具有最小的離子強(qiáng)度，并且不應(yīng)含有任何氨基（例如Tris）、硫醇、羥基和酚。但洗滌或儲存緩沖液可含有氨基、硫醇、羥基和酚基團(tuán)。
2) 封閉緩沖液（Blocking Buffer）: 1 M ethanolamine， pH 9.0;
3) 洗滌緩沖液（Wash buffer）: PBS, pH 7.4.;
B. 偶聯(lián)方法
注意：將環(huán)氧基磁珠按10mg/ml懸浮在50％丙酮中，劇烈渦旋分散磁珠并儲存在4 ℃。使用前混勻磁珠。
1. 將10mg磁珠轉(zhuǎn)移至EP管中。
2. 將EP管置于磁磁力架上1min，吸棄上清液，用1ml偶聯(lián)緩沖液重新懸浮磁珠。
3. 重復(fù)步驟2三次。
注意：一旦水化，應(yīng)盡快使用磁珠。
4. 將適量的蛋白質(zhì)或肽溶解在1ml偶聯(lián)緩沖液中。
注意：環(huán)氧基活化磁珠的偶聯(lián)效率因配體而異。用戶應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)優(yōu)化配體的濃度。推薦1-10 mg/ml用于蛋白質(zhì)結(jié)合；對于小肽，配體濃度應(yīng)超過200 umol/ml。
5. 將蛋白質(zhì)溶液加入洗過的磁珠中，重懸磁珠并孵育。
注意：胺類配體如蛋白質(zhì)在25 ℃下偶聯(lián)15~48 h。但是，如果配體對溫度非常敏感，可在4℃下偶聯(lián)至少48~72 h。肽、含羥基的配體例如碳水化合物或含巰基的配體在25~75 ℃下偶聯(lián)4~15 h。
6. 用1ml PBS緩沖液洗磁珠3次。
7. 將0.5~1ml封閉緩沖液添加至磁珠中，并在4℃下孵育至少4h或過夜。
8. 用1ml PBS緩沖液洗磁珠4-6次。
9. 用PBS緩沖液（0.1％疊氮化物）將磁珠重懸至所需濃度，儲存于2~8 ℃并避免凍結(jié)。
C. 偶聯(lián)效率的優(yōu)化
C-1．配體用量優(yōu)化
在特定配體濃度以下，緩沖液中配體的量與環(huán)氧基磁珠的偶聯(lián)量成正比；當(dāng)配體濃度達(dá)到一定濃度后，配體偶聯(lián)效率通常會逐漸減小。通常1~10 mg配體/ g磁珠是研究最佳配體濃度的范圍。
C-2．偶聯(lián)用緩沖液與pH值
為了有效控制pH值，建議使用10 mM的最小緩沖液強(qiáng)度。 合適的緩沖液包括碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽；不要使用包含Tris、甘氨酸或其他親核試劑等組成的緩沖液。 環(huán)氧基磁珠在pH 9?13下較易與配體偶聯(lián)，偶聯(lián)pH的選擇通常受到配體在堿性緩沖液中穩(wěn)定性的限制。環(huán)氧基團(tuán)在較高pH下與配體反應(yīng)更快，然而高的pH同樣促進(jìn)了環(huán)氧基團(tuán)的競爭性水解反應(yīng)。偶聯(lián)含羥基的配體大約pH?13。
C-3．偶聯(lián)溫度和時間
大多數(shù)應(yīng)用推薦在?20°C過夜偶聯(lián)配體。 若在選定溫度下配體穩(wěn)定，則可在較高溫度下進(jìn)行偶聯(lián)，最高可達(dá)40°C，通常反應(yīng)更快。 若偶聯(lián)緩沖液pH和反應(yīng)溫度都高，則偶聯(lián)時間需縮短。應(yīng)避免延長偶聯(lián)反應(yīng)時間可能導(dǎo)致的配體降解。
C-4．剩余活性基團(tuán)的封閉與洗滌
偶聯(lián)后殘留在磁珠上的活性基團(tuán)需被封閉以避免與感興趣的蛋白質(zhì)發(fā)生不希望的反應(yīng)。 使用1M乙醇胺在pH 8-9進(jìn)行封閉反應(yīng)4h。封閉完成后需要使用偶聯(lián)緩沖液徹底洗滌磁珠以除去過量配體。對通過離子相互作用被捕獲在樹脂上少量配體，建議交替使用酸性緩沖液（100mM乙酸鹽，500mM NaCl，pH4.0）和堿性緩沖液（100mM磷酸鹽，500mM NaCl，pH8.0）洗滌。
本公司還提供二氧化硅包覆修飾的環(huán)氧基磁珠，請參考 http://m.5000js.com/Product/5730985239.html
客戶發(fā)表論文：
1. Zhang M, Luo M, Chen G, et al. A novel Affi-Cova magnetic nanoparticles for one-step covalent immobilization of His-tagged enzyme directly from crude cell lysate[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2024: 135811.
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