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一、概述
肝素瓊脂糖磁珠（Magarose-Heparin）具快速磁響應(yīng)性、豐富的肝素密度、極高的物理化學(xué)穩(wěn)定性等特點(diǎn)。一方面，可作為親和介質(zhì)的配基，與生長(zhǎng)因子及抗凝血酶AT Ⅲ等生物分子發(fā)生特異性結(jié)合；另一方面，由于表面帶有大量負(fù)電性硫酸根離子基團(tuán)，可作為一種陽(yáng)離子交換介質(zhì)，在一定pH條件下，與帶正電的蛋白具有強(qiáng)的結(jié)合能力。對(duì)于熟練的操作者，在短時(shí)間內(nèi)就能完成高純度目的蛋白的提取，能輕松實(shí)現(xiàn)多樣品的平行處理，實(shí)現(xiàn)高通量的蛋白純化。適用于抗凝血因子III、凝血因子、核酸結(jié)合蛋白、脂蛋白、干擾素、類(lèi)固醇受體、凝血酶及類(lèi)凝血酶等生物大分子的純化。
二、產(chǎn)品特性
產(chǎn)品名稱
Magarose-Heparin
貨號(hào)
PMAG005
磁珠濃度
25%（v/v）in 20% 乙醇
配基及密度
~3 mg Heparin/ml磁珠
介質(zhì)
6%交聯(lián)磁性瓊脂糖
粒徑
20-45μm
配體結(jié)合
2~3 mg抗凝血酶 Ⅲ/ml磁珠
保存
2~8℃保存一年
三、使用方法
1. 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
w 豐富的結(jié)合位點(diǎn)，加強(qiáng)了與配體的特異性結(jié)合；
w 磁響應(yīng)速度快，減少操作時(shí)間；
w 磁珠具良好分散性和重懸性，提高操作的便捷性；
w 配基具有良好的物理化學(xué)穩(wěn)定性，提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性及可重復(fù)性；
2. 操作流程（以純化人血漿中抗凝血酶 Ⅲ為例）
1. 樣品處理：取人血漿1 mL加入至1.5 mL EP管中，接著加入500 μL Binding Buffer（50 mM Tris-HCl, pH 8.0），充分混勻。
2. 磁珠預(yù)處理：將磁珠充分重懸；取400 μL 25%（v/v）磁珠懸液置于另一新的1.5 mL EP管。磁分離棄上清，用1 mL Binding Buffer洗滌2次，磁分離，管中磁珠可直接用于抗體分離。
3. 蛋白吸附：在步驟2預(yù)處理的磁珠管中加入步驟1處理的樣品溶液，漩渦振蕩均勻，在室溫下（約25°C）將EP管置于垂直混合儀混勻15~30 min，使樣品和磁珠充分接觸并吸附，然后進(jìn)行磁性分離，移棄上清液。
4. 磁珠洗滌：向EP管加入1mL Binding Buffer，重懸磁珠1 min后磁分離，移棄上清；該操作重復(fù)3次。
注意事項(xiàng)：根據(jù)洗脫蛋白SDS-PAGE圖譜，在Binding Buffer中適當(dāng)加入一定濃度NaCl，可有效去除非特異性吸附蛋白，使操作者獲得更高濃度目標(biāo)蛋白。
5. 蛋白洗脫：在上述EP管中加入0.2 mL Elution Buffer （50 mM Tris-HCl, 1~2 M NaCl, pH 8.0），重懸磁珠，室溫下（約25°C）將EP管置于垂直混合儀混勻10~15 min后，磁分離，收集上清至新的EP管。
6. 磁珠再生：向EP管中加入1 mL純水，重懸磁珠后磁分離，移棄上清，重復(fù)操作3次；接著改用Binding Buffer洗滌磁珠3次。磁珠多次使用后會(huì)有沉淀蛋白、強(qiáng)疏水性蛋白、脂蛋白等雜質(zhì)非特異性吸附到磁珠上，為保證磁珠的使用效率，建議進(jìn)行在位清洗（CIP）。
7. 在位清洗（CIP）：采用0.1M NaOH、8 M 尿素、純化水、Binding Buffer依次洗磁珠2次；最后加入400 μL Storage Buffer(20%乙醇)重懸磁珠，2~8°C保存。
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