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【產(chǎn)品介紹】
磁珠法細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒是普睿邁格生物科技有限公司最新研制的一種細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒。本產(chǎn)品采用Lysis Buffer和Proteinase K裂解細(xì)菌細(xì)胞，釋放出基因組DNA，在結(jié)合液的作用下磁珠選擇性的吸附裂解液中的基因組DNA。通過洗滌液的清洗完全除去磁珠吸附的少量雜質(zhì)。在Elution Buffer的作用下Purimag Beads釋放吸附的基因組DNA，即獲得高質(zhì)量的基因組DNA。從1ml的菌液中可以獲得10~20 μg DNA，OD260/OD280比值一般為1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游實(shí)驗(yàn)。適用于手工細(xì)菌基因組DNA的提取，可配合各類磁棒式核酸提取儀或自動化/半自動化工作站。
【特點(diǎn)】
l 耗時少：細(xì)菌DNA提取周期在50分鐘左右；
l 操作簡便：提取過程無需離心；
l 無毒無害：試劑中不含有氯仿，酚等有毒物質(zhì)；
l 效果穩(wěn)定：OD260/OD280穩(wěn)定在1.7-2.0之間，獲得細(xì)菌基因組DNA的純度更高；
l 自動化：可以同時處理多個樣品，實(shí)現(xiàn)細(xì)菌基因組提取的高通量化和自動化。
【保存方法及注意事項(xiàng)】
請將試劑盒中的PuriMag Beads、Proteinase K和RNase A置于2-8℃保存，其余試劑室溫保存，有效期詳見包裝。
l 嚴(yán)禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會對磁珠造成不可逆的損害。
l 磁珠長期放置后會聚集成團(tuán)，從而使磁珠表面積減小，降低樣品回收得率，使用前一定要渦旋振蕩徹底混勻磁珠（通常需渦旋振蕩20秒）。
【試劑盒組成】
組分
100次
保存
Lysis buffer
20 ml
常溫
Binding buffer
18ml
Wash buffer
75%乙醇（用戶自備）
Elution buffer
10 ml
PuriMag bead
2 ml
2-8℃
RNase A
蛋白酶K
1 ml
溶菌酶
2 ml（選配試劑）
異丙醇
用戶自備
DNA濃度及純度檢測 ：（1）得到的基因組DNA片段大小與樣品保存時間、操作過程中剪切力等因素有關(guān)，所得DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度和純度。 （2）DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260=1相當(dāng)于大約50ng/ul雙鏈DNA，40ng/ul單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7~1.9，如果洗脫時使用去離子水，比值會偏低，因?yàn)?span>pH和離子會影響吸光度，并不表示純度低。
【操作步驟】
分菌→
1) 牙簽挑取平板菌落（1 mm）或取過夜培養(yǎng)細(xì)菌1 ml（細(xì)胞數(shù)為108-109）加入1.5 ml離心管。9000 rpm離心1 min，棄上清。（可選步驟：對于革蘭氏陽性菌，加入200 ul溶菌酶溶液重懸菌體，37 ℃水浴30~60 min。對細(xì)胞壁較厚的革蘭氏陽性菌，如金黃色葡萄球菌，可補(bǔ)加溶葡球菌酶助破壁。離心后備用。）
裂解→
2) 加入200 ul Lysis buffer搖勻，漩渦振蕩混勻，室溫溫育10分鐘至溶液變粘稠；加入10 ul蛋白酶K，漩渦振蕩器混勻，56 ℃消化30 min。（可選步驟：若革蘭氏陽性菌溶液渾濁未消化完全，可12000 rpm離心2min后取上清使用。）
除RNA→
3) 加入20 ul的 RNase A, 漩渦振蕩混勻，室溫溫育10分鐘以除去RNA。
除蛋白→
4) 向離心管中加入180 ul Binding buffer，漩渦振蕩1-2 s。
結(jié)合→
5) 取400 ul試樣加入磁珠懸液中（20 ul的 PuriMag bead和280 ul的異丙醇在一個新離心管中先預(yù)混），靜置5分鐘后，于磁力架上磁分離20 s，去上清。
洗滌→
6) 向離心管加入700 ul Wash buffer，移液槍緩慢吹打混勻，磁力架上靜置20 s，小心吸棄上清（重復(fù)該步驟2次）。倒置離心管2-3 min，室溫晾干5 min，讓殘留乙醇揮發(fā)干凈，以免影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
洗脫→
7) 向離心管加入50~100 ul Elution buffer，緩慢吹打混勻1~2 min。（Elution buffer在65~70 ℃中預(yù)熱后洗脫效果更好，減小洗脫體積或多次洗脫可增大DNA濃度）離心管磁力架上靜置0.5 min，小心吸走上清放入新離心管即為提取的DNA，存放于2-8 ℃，長期存放需置于-20 ℃。
提示：本試劑盒僅限科研用途。
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