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PuriMag G-Avidin蛋白磁珠是將來源于蛋清的Avidin蛋白與羧基聚苯乙烯顆粒的共價偶聯(lián)制備的磁性顆粒。Avidin蛋白是雞蛋清和鳥類組織中存在的蛋白質(zhì)。Avidin蛋白是一種富含色氨酸的糖蛋白，對酸或蛋白水解酶的變性具有很強(qiáng)的抵抗力。得到的磁珠是在pH范圍為2至11時穩(wěn)定。它們可用于親和層析純化，測定開發(fā)和免疫沉淀。另外，通過將Biotin摻入一種擴(kuò)增聚合物中，Avidin磁性顆粒特別適用于物理分離聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中產(chǎn)生的兩條DNA鏈。 PuriMag G-Avidin- Biotin生物分子復(fù)合物易于使用磁鐵與未結(jié)合的生物素 - 生物分子分離，因此提供了一種快速，簡潔的方法來標(biāo)記具有磁性納米顆粒的生物分子。
直徑：200nm
在2-8℃（最多3個月）儲存在緩沖液（25mM tris-HCl，0.15M NaCl，0.05％吐溫20,0.09％NaN 3，pH 7.2）中。不要凍結(jié)試劑。
生物素化的分子可以用8M鹽酸胍，pH 1.5或用SDS-PAGE樣品緩沖液煮沸從PuriMag G-抗生物素蛋白中洗脫。這些苛刻的洗脫條件可能導(dǎo)致抗生物素蛋白亞基浸入樣品中。另外，抗生物素蛋白可能因這些亞基的喪失而喪失相當(dāng)大的結(jié)合能力。
?本說明書中包含的協(xié)議是本產(chǎn)品的應(yīng)用示例。特定應(yīng)用和系統(tǒng)需要優(yōu)化。
?洗脫緩沖液：0.1M甘氨酸?HCl，pH 2.8
B.程序 注意：所需抗原的量和孵育時間取決于所用的抗體 - 抗原系統(tǒng)，并且必須針對每個特定系統(tǒng)進(jìn)行優(yōu)化。為了適當(dāng)混合，確保總反應(yīng)體積不能完全填充微量離心管。 1.將Avidin磁珠和試劑平衡至室溫。 2.為了形成免疫復(fù)合物，將生物素化抗體加入樣品或裂解液中，在室溫下孵育至少30分鐘或在4℃下孵育過夜。 3.輕輕旋轉(zhuǎn)Avidin磁珠瓶，以獲得均勻的懸浮液。將適量的珠漿移液到微量離心管中。磁性分離并丟棄上清液。 4.加入結(jié)合緩沖液洗滌Avidin磁珠兩次，磁力分離2分鐘。丟棄上清液。 5.將免疫復(fù)合物添加到珠子中并在室溫或4℃下混合孵育1小時。 6.用結(jié)合緩沖液洗滌抗生物素蛋白結(jié)合的復(fù)合物并磁力分離2分鐘。丟棄上清液。重復(fù)此洗滌程序至少四次。 7.樣品可以在SDS-PAGE樣品緩沖液中煮沸并電泳用于分析。或者，將洗脫緩沖液加入到珠子中以回收抗原。如果使用0.1M甘氨酸?HCl，pH 2.8，則通過加入適當(dāng)?shù)臐饪s緩沖液如1M Tris，pH 7.5（100μL該緩沖液至1mL樣品就足夠）立即去除液體并立即調(diào)節(jié)回收級分的pH。
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