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MS-AMN001
1 ml
MS-AMN010
10 ml
1. 產(chǎn)品描述
MagStart-Amine 是由超多孔聚合物網(wǎng)絡(luò)組成的磁性聚合物微載體。通過與各種化學(xué)偶聯(lián)劑對(duì)微粒（或生物制品）進(jìn)行化學(xué)活化來共價(jià)偶聯(lián)生物配體。最常用的活化試劑包括N-羥基琥珀酰亞胺（NHS或Sulfo-NHS）和碳二亞胺衍生物（如1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽），以及雙功能交聯(lián)劑（如戊二醛或1,4-丁二醇二縮水甘油醚）。MagStart微球技術(shù)的進(jìn)步使生物分子可在整個(gè)微?？臻g滲透和結(jié)合，為生物分子的固定化提供了極高的結(jié)合能力?？商娲鶰agReSyn?-Amine的使用。
MagStart-Amine微粒極高的官能團(tuán)密度為生物分子偶聯(lián)提供了高濃度的反應(yīng)位點(diǎn)。MagStart-Amine的高結(jié)合載量允許減少高活性功能微粒的體積來實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)方案小型化，進(jìn)而最大限度地減少所需試劑的體積，從而允許以更小的體積應(yīng)用固定化配體。MagStart可快速磁分離（<10 秒），通過磁壓縮減少了洗滌和洗脫過程中顆粒間隙，從而提高了效率和回收率，強(qiáng)磁性還可防止微粒的意外丟棄而避免樣品損失。
Product Specifications
Description
Iron oxide-containing magnetic polymer microspheres
Application
Immobilization of proteins, peptides, enzymes, antibodies and other ligands
Matrix
Proprietary polymer
Core
Iron (II, III) oxide (Magnetite)
Functional group
Primary amine
Binding capacity
≥20 mg/ml (BSA)
Particle Size
~5–10 μm
Formulation
20 mg/ml suspension in 20% ethanol
Stability
pH 3.5~10, 4~60 ℃
Storage
Store at 4~8?C until expiry date on label. DO NOT FREEZE!
注意：不當(dāng)儲(chǔ)存、微粒干燥、細(xì)菌污染或離心回收可能導(dǎo)致容量/性能的不可逆損失。使用前應(yīng)充分混勻。
2. 偶聯(lián)流程
2.1. 樣品制備
有效固定配體的重要考慮因素是偶聯(lián)緩沖液的離子強(qiáng)度和pH值。偶聯(lián)緩沖液應(yīng)不含伯胺類化合物（例如Tris）。如偶聯(lián)的樣品中含有可能干擾偶聯(lián)反應(yīng)的污染物，例如鹽、糖、穩(wěn)定劑或化合物，則應(yīng)通過脫鹽、超濾或類似技術(shù)從樣品中去除這些成分。偶聯(lián)效率取決于配體，可能需要優(yōu)化才能達(dá)到預(yù)期的結(jié)果。EDC/NHS 活化的蛋白質(zhì)在加入 MagStart-Amine之前應(yīng)進(jìn)行脫鹽，因?yàn)檫@些副產(chǎn)物可能會(huì)干擾偶聯(lián)。
注意：所有試劑都應(yīng)是新鮮制備的，并具有分析級(jí)，以確保最佳性能。下面描述的程序、方法、緩沖溶液和配體僅供參考，并非旨在限制。MagStart-Amine與一系列不同的配體固定緩沖液兼容。偶聯(lián)量取決于配體，應(yīng)優(yōu)化條件以確保獲得預(yù)期結(jié)果。
2.2. MagStart-Amine胺平衡
MagStart-Amine以 20 mg/ml懸浮于20% 乙醇液的形式提供。使用前需要去除運(yùn)輸溶液，并在結(jié)合緩沖液中平衡微粒?？筛鶕?jù)推薦的方案按比例放大或縮小以滿足您的要求。當(dāng)前方案估計(jì)結(jié)合 ~1 mg 蛋白質(zhì)。
1）通過渦旋混合3秒將MagStart-Amine徹底重懸，以確保懸浮液均勻。
2）將 50 μl （1 mg） MagStart-Amine轉(zhuǎn)移到新離心管中。我們建議使用低結(jié)合試管。
3）將離心管放在磁磁力架上，磁分離。
4）用移液管吸棄上清溶液。
5）在200 μl超純水或選擇用于配體偶聯(lián)的合適緩沖液中洗滌/平衡微粒。
6）將離心管放在磁力架上，磁分離吸出上清液。
7）重復(fù)步驟5和6，再洗滌兩次。
8）去除緩沖液后，MagStart-Amine即可進(jìn)行配體結(jié)合的功能化。
2.3. MagStart-Amine的活化
圖1. 胺基活化成醛基偶聯(lián)流程
這里提供了一個(gè)戊二醛活化方案示例，用于胺化配體的偶聯(lián)。戊二醛是一種同雙官能團(tuán)胺反應(yīng)偶聯(lián)劑，可用于活化胺功能微粒的表面，并為隨后的含胺配體偶聯(lián)提供醛基。
備注： 本方案可根據(jù)使用其他同官能團(tuán)或雜官能團(tuán)偶聯(lián)劑偶聯(lián)的情況進(jìn)行調(diào)整。戊二醛和其他雙官能偶聯(lián)試劑通常具有危險(xiǎn)性和/或毒性，使用時(shí)應(yīng)小心。
1） 在超純水（或固定化兼容的緩沖液，如 50 mM 三乙醇胺，pH 8.0）中配制 200 μl 的 5%戊二醛活化溶液。
注意：堿性 pH 有利于胺-醛反應(yīng)，活化/固定化溶液的 pH 應(yīng)大于 8.0
2）將戊二醛溶液加入 2.2 中洗滌/平衡過的磁微粒中，充分重懸后渦旋 3 秒鐘。
3）在室溫下攪拌 3 小時(shí)。
4）將離心管放在磁力架上，磁分離移去上清液。
5）用 200 μl 超純水洗滌兩次，然后用合適的無胺結(jié)合/偶聯(lián)緩沖液洗滌兩次。
6) 在微粒懸液中加入 2-10 mg/ml的配體或蛋白。
2.4蛋白質(zhì)偶聯(lián)程序
注意：如用于固定的蛋白含量較低，可能會(huì)發(fā)生顆粒聚集。如您沒有足夠的蛋白與珠子偶聯(lián)，可以將載體蛋白（如BSA或酪蛋白）與感興趣的蛋白質(zhì)混合，以提供足夠的含量，避免聚集。
1）在合適的偶聯(lián)緩沖液（不含伯胺，例如三乙醇胺，pH 8.0）中制備待偶聯(lián)蛋白，并添加到微粒懸液中。
2）在室溫下或在4°C下（對(duì)于溫度敏感的配體），攪拌反應(yīng)2–24小時(shí)。
3）將離心管放在磁力架上，磁分離。
4）吸除上清或保留以供后續(xù)測(cè)定偶聯(lián)效率。
5）僅用200μl偶聯(lián)緩沖液洗滌兩次（兩次洗滌之間平衡1分鐘）。磁分離，吸棄上清。
6）可選：伯胺與醛的偶聯(lián)導(dǎo)致席夫堿鍵的形成。可以使用硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉來實(shí)現(xiàn)該鍵的穩(wěn)定。有關(guān)合適的方案，請(qǐng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)。
7） 加入500μl含有過量含胺封閉劑的合適緩沖液（例如PBS中的200mM乙醇胺或天冬氨酸，pH 8.0），并在室溫下孵育3小時(shí)（或在4?C） 以封閉微粒剩余的活化胺基。
8）磁分離，吸棄多余的淬滅劑。
9） 可選：用500μl含0.5–1 M NaCl的緩沖溶液洗滌三次，以去除可能的非共價(jià)結(jié)合蛋白質(zhì)和非反應(yīng)物。磁分離，吸棄洗滌溶液。
10） 在合適體積的緩沖液中清洗/平衡含有固定化配體的微粒，以備儲(chǔ)存或進(jìn)一步應(yīng)用。
11） 固定化生物制品可與合適的防腐劑（如含0.05%疊氮化鈉的磷酸鈉緩沖液）在4°C下儲(chǔ)存。不要冷凍微粒。
3. 常見問題
問題
可能原因
改善方法
配體不與微粒結(jié)合
戊二醛溶液過期
使用新制備的5–10%戊二醛
不正確的結(jié)合pH
確保pH>8.0
校準(zhǔn)pH計(jì)
蛋白質(zhì)降解
添加蛋白酶抑制劑
樣品或溶液中的干擾物阻止結(jié)合
確保緩沖液不含伯胺，例如不使用Tris或甘氨酸緩沖液。如含則需脫鹽
微粒數(shù)量不足
增加顆粒的數(shù)量
蛋白質(zhì)/配體含量過低
使用濃度更高的配體溶液，將總蛋白濃度增加到2~10 mg/ml
參考文獻(xiàn)：
1. Tang J X, Cabrera-Orefice A, Meisterknecht J, et al. COA5 has an essential role in the early stage of mitochondrial complex IV assembly[J]. Life Science Alliance, 2025, 8(3).
2. Wright S C, Motso A, Koutsilieri S, et al. GLP-1R signaling neighborhoods associate with the susceptibility to adverse drug reactions of incretin mimetics[J]. Nature communications, 2023, 14(1): 6243.
3. Guzman U H, Martinez-Val A, Ye Z, et al. Ultra-fast label-free quantification and comprehensive proteome coverage with narrow-window data-independent acquisition[J]. Nature biotechnology, 2024: 1-12.
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