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羧基磁珠偶聯(lián)用配套緩沖液（套裝）

更新：2020-7-6 22:32:24點(diǎn)擊：

產(chǎn)品品牌PuriMag
產(chǎn)品型號(hào)PuriMag Buffer

產(chǎn)品介紹

羧基磁珠偶聯(lián)緩沖液套裝

PuriMag Buffer Kit for coupling of carboxyl bead

（Cat：PB0001）

1. 簡(jiǎn)介

羧基磁珠是常用的偶聯(lián)載體，本試劑盒提供用于羧基與氨基的偶聯(lián)所需的緩沖液，譬如羧基微珠偶聯(lián)抗體、氨基修飾DNA等。

2. 試劑盒組成

緩沖液	體積	組成	注意
Coupling Buffer （偶聯(lián)緩沖液）	50 ml	50 mM MES, pH 6.0, 0.01% Triton X-100
Coupling Agent （偶聯(lián)試劑）	50mg×1	EDC；50 mg/ml×1ml （用前加入1ml Coupling Buffer）	盡量現(xiàn)配現(xiàn)用，溶液保存不超過(guò)1個(gè)月
Coupling Agent （偶聯(lián)試劑）	50mg×1	Sulfo-NHS；50 mg/ml×1ml （用前加入1ml Coupling Buffer）	盡量現(xiàn)配現(xiàn)用，溶液保存不超過(guò)1個(gè)月
Quench Buffer （淬滅緩沖液）	50 ml	TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;
Storage Buffer （儲(chǔ)存緩沖液）	10 ml	TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20, 0.05%NaN₃.

3. 兩步偶聯(lián)方案

本方案通過(guò)加入穩(wěn)定胺反應(yīng)性中間體的sulfo-NHS來(lái)增加EDC介導(dǎo)的反應(yīng)的效率。本方案中涉及的偶聯(lián)對(duì)象（蛋白、氨基修飾核酸、其它含伯氨基化合物）的使用量可根據(jù)需要進(jìn)一步優(yōu)化以達(dá)到最優(yōu)偶聯(lián)率。

1. 確保蛋白或配體在無(wú)胺偶聯(lián)緩沖液中。100μL偶聯(lián)緩沖液中需50?400μg蛋白用于偶聯(lián)。

2. 渦旋振蕩重懸羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中，磁分離并吸棄上清。

3. 加入200μL偶聯(lián)緩沖液。劇烈漩渦20秒，磁分離并吸棄上清。

4. 按步驟3再清洗羧基磁珠兩次。

5. 使用前用偶聯(lián)緩沖液配制EDC（50 mg / mL）。使用前用偶聯(lián)緩沖液配制Sulfo-NHS（50mg / mL）。

6. 向磁珠中加入60μL偶聯(lián)緩沖液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液?；靹?。

7. 室溫下混勻孵育15分鐘。磁分離并吸棄上清。

8. 用200μL偶聯(lián)緩沖液清洗磁珠。渦旋混勻，磁分離并吸棄上清。

9. 加入100μL偶聯(lián)緩沖液和50?400μg蛋白或配體。渦旋混勻。室溫下連續(xù)混合孵育0.5?4小時(shí)。

10. 將試管放入磁力架，磁分離吸棄上清。該上清液含未結(jié)合的配體，如優(yōu)化方案可保存用于分析。

11. 向羧基磁珠加入250μL淬滅緩沖液。渦旋20秒，磁分離并吸棄上清。

12. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。室溫孵育30?60分鐘。磁分離并吸棄上清。