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一、概述
CNBr 瓊脂糖磁珠是PuriMag公司新開發(fā)活化好的磁珠，它采用平均粒徑為20~45 μm的6%高度交聯(lián)瓊脂糖凝膠，表面用大分子糖鏈接枝，使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性，用它合成的親和填料，它避免蛋白之間位阻以及蛋白和填料的位阻干擾，使其同等配基下有更高載量，同時有更好的分辨率。由于比表面積大，平衡和洗脫的時間也更短。它經(jīng)過接枝即使是純化病毒，抗體等大分子的物質(zhì)，載量基本保持不變?？梢栽谒嗷蛘哂袡C(jī)相中偶聯(lián)。提供的該CNBr 瓊脂糖磁珠已活化。
二、產(chǎn)品特性
產(chǎn)品名稱
Magarose-CNBr
貨號
PMAG011
磁珠濃度
凍干粉
配基密度
~90 μmol CNBr/ ml磁珠
介質(zhì)
6%交聯(lián)磁性瓊脂糖
粒徑
20-45μm
配體結(jié)合
>20 mg BSA/ml磁珠
保存
2~8℃保存一年
注：磁珠蛋白結(jié)合量與目標(biāo)蛋白特性相關(guān)，此處僅作參考值。
三、使用方法
1. 產(chǎn)品特點(diǎn)
w 偶聯(lián)條件溫和(pH8~10、4~45°C、時間1~16小時)，偶聯(lián)效率高(每1 mL磁珠可偶聯(lián)18~30 mg BSA)。
w 填料不需要處理，直接計算合適的量用于偶聯(lián)。
w 保存時間長，4~8 ℃可以保存一年半，-20℃可以保存2年，同時應(yīng)該避免受潮。
w 可偶聯(lián)包含多糖，蛋白，核酸，抗體以及其他含有NH2配基的物質(zhì)，使用范圍廣。
2. 蛋白偶聯(lián)操作步驟
以用該CNBr活化瓊脂糖磁珠偶聯(lián)牛血清白蛋白(BSA)為例：
1) 取BSA 100 mg溶解于10 ml的0.25 M碳酸鈉緩沖液中，pH9.0。
2) 將磁珠用0.25 M碳酸鈉緩沖液（pH9.0）溶脹后，吸取適量的磁珠，用上述緩沖液洗滌2次。
3) 將5 mL磁珠加入溶解后的BSA 溶液中混合，在搖床上振蕩，25℃偶聯(lián)6小時。
4) 然后加0.1M Tris-HCl，pH8.3，再反應(yīng)6個小時封閉剩余的基團(tuán)。
5) 偶聯(lián)了BSA 的磁珠，用1 M NaCl 溶液洗3-5次，收集偶聯(lián)后剩余的液體以及洗滌的溶液測定BSA 的總量，再用純水洗滌磁珠3次，最后將磁珠保存在相應(yīng)蛋白保存緩沖液中。
6) BSA 的偶聯(lián)量為25 mg/ml. 計算方法：BSA 的吸附載量=（G0—G1）/V。
G0：BSA 總使用量，單位：mg；
G1：偶聯(lián)反應(yīng)后未偶聯(lián)的 BSA 的量，單位：mg；
V：填料的體積，單位：mL；
備注：該偶聯(lián)方法可用于偶聯(lián)單抗及其它蛋白，均能獲得很好的偶聯(lián)效果。
3. 注意事項(xiàng)
1) 活化的填料現(xiàn)取現(xiàn)用，免時間過長造成偶聯(lián)活性降低。其余的可以密封4~8℃保存1年半，避免潮解。但是最好的-20℃密封保存，這樣可以保存放兩年。
2) 如果要偶聯(lián)的蛋白不穩(wěn)定，可在搖床上4°C振搖偶聯(lián)12~16 小時，以維持配基的活性。如果沒有把握可以配相應(yīng)濃度的配基溶液0.5~1 ml，分別選擇不同pH 及溫度然后不加填料模擬偶聯(lián)條件，到時間觀察溶液是否有沉淀，如果有沉淀偶聯(lián)效果就不好，這時可以稍微降低pH 或溫度，同時可以加2.5%左右的甘油或PEG 保護(hù)蛋白，避免沉淀，總之對于任何配基最好能了解其溶解性及穩(wěn)定性，避免實(shí)驗(yàn)失敗導(dǎo)致?lián)p失。
3) 偶聯(lián)配基后盡快清洗填料，避免在高pH 條件中，配基失活。
4) 更穩(wěn)定的配基可以直接溶解于NaOH 溶液或者碳酸鈉溶液中進(jìn)行偶聯(lián)，溫度可適當(dāng)提高，偶聯(lián)時間則相應(yīng)縮短至1~4小時。
5) 偶聯(lián)蛋白的最適pH為可以在8.0~10左右，在室溫或4°C均可，溫度與pH 的提高均能增加配基的吸附載量，根據(jù)蛋白的穩(wěn)定選擇合適的pH 和溫度，偶聯(lián)蛋白溶液的濃度為5~20 mg/ml。磁珠體積和配基溶液的體積為1：1.5 或者為1：2。
6) 偶聯(lián)的緩沖液包括碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液，但絕對不能使用Tris、甘氨酸等含有氨基的物質(zhì)。
7) 偶聯(lián)的物質(zhì)如果是小分子的化合物，例如氨基酸或其他帶NH2 的小分子配基，那可以直接把配基加到0.05 M NaOH 或0.5M 碳酸鈉溶液中配置成10~20 mg/ml 的溶液，其他條件不變，這樣偶聯(lián)效果更好。
8) 在偶聯(lián)中要把填料能混勻完全懸浮起來，避免劇烈攪拌使填料有小顆粒降低流速。
9) 本試劑只能夠用于體外實(shí)驗(yàn)，不能夠用于臨床、治療和動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)等，由此產(chǎn)生的后果概不承擔(dān)責(zé)任。
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