常見(jiàn)外泌體提取試劑盒特點(diǎn)
外泌體（exosomes）是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的直徑大約為 30 ~ 150 nm 的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡。它廣泛存在并分布于各種體液中，攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子，形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng)，影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。
外泌體提取試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單可靠的方法可從細(xì)胞培養(yǎng)上清液，血清，血漿，乳液，尿液，唾液、酵母、植物中提取完整的外泌體。本產(chǎn)品提取的外泌體囊泡適用于下游的電鏡分析、NTA分析、納米流式（NanoFCM）分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測(cè)序等應(yīng)用。
方法對(duì)比
研究外泌體內(nèi)涵成分的前提是對(duì)其進(jìn)行高質(zhì)量的提取，由于外泌體粒徑較小且與多種其他生物分子混合在一起，導(dǎo)致其分離純化困難，阻礙了對(duì)其的進(jìn)一步研究。
近年來(lái)，研究人員根據(jù)外泌體理化性質(zhì)研發(fā)了多種分離純化方法：常用的有超速離心法、密度梯度超速離心法、超濾法、多聚物沉淀法（PEG）、免疫磁珠法、試劑盒分離法等。
而對(duì)于外泌體的分離，首先要關(guān)注外泌體的提取質(zhì)量，包括純度、囊泡狀態(tài)、得率及重復(fù)性等方面的評(píng)估，然后才是技術(shù)路線的選擇。
| 純化方法 | 外囊泡純度 | 囊泡狀態(tài) | 可操作性 | 回收量 | 重復(fù)性 | 設(shè)備要求 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 超速離心法 | ★★ | ★★ | ★★★ | ★★ | ★ | 超速離心機(jī) |
| 密度梯度離心法 | ★★★★ | ★★ | ★ | ★ | ★ | 超速離心機(jī) |
| 超濾法 | ★★ | ★★★ | ★★★ | ★★ | ★★ | 普通離心機(jī) |
| 多聚物沉淀法 | ★ | ★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★ | 普通離心機(jī) |
|
抗體親和磁珠純化 |
★★★★ | ★★★ | ★★★ | ★★ | ★★★★ | 普通離心機(jī)+磁力架 |
| 通用磁珠法 | ★★★ | ★★★ | ★★★ | ★★★ | ★★★ | 普通離心機(jī)+磁力架 |
1. 超速離心法是最常用的外泌體純化手段，目前已發(fā)表文獻(xiàn)引用最多的方法，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。
優(yōu)點(diǎn)：無(wú)需特殊試劑，操作簡(jiǎn)便，適合大批量樣本。
缺點(diǎn)：耗時(shí)耗力，純度相對(duì)較低，回收率不穩(wěn)定，重復(fù)離心會(huì)一定程度損傷外泌體，設(shè)備要求高。
2. 密度梯度超速離心法是在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過(guò)密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/mL的密度范圍富集。
優(yōu)點(diǎn)：純度相對(duì)較高，適合大批量樣本。
缺點(diǎn)：步驟繁瑣，耗時(shí)，回收率不穩(wěn)定，重復(fù)離心會(huì)一定程度損傷外泌體，設(shè)備要求高。
3. 超濾法是將溶劑及小分子物質(zhì)過(guò)濾到膜的另一側(cè)，而將相對(duì)大分子物質(zhì)截留在超濾膜上，以達(dá)到分離的目的。
優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單高效，不影響外泌體的完整性。
缺點(diǎn)：外泌體可能會(huì)阻塞過(guò)濾孔，導(dǎo)致膜的壽命減短，分離效率和純度較低。此外，截留在膜上的外泌體間也會(huì)發(fā)生粘附，導(dǎo)致產(chǎn)量降低。
4. 多聚物沉淀法根據(jù)化合物與外泌體的理化特性，利用共沉淀或者反向篩選的方式對(duì)外泌體進(jìn)行分離純化。
優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、無(wú)設(shè)備限制。
缺點(diǎn)：純度較低，存在假陽(yáng)性（雜蛋白較多或一些難以去除的聚合物），機(jī)械力或化學(xué)添加物對(duì)外泌體產(chǎn)生破壞，存在于分離物中的聚合物也可能會(huì)干擾下游分析等。
5. 抗體親和（磁珠）法利用包被單克隆抗體的磁珠結(jié)合外泌體，外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。
優(yōu)點(diǎn)：純度較高，特異性和重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便、無(wú)設(shè)備限制。
缺點(diǎn)：效率和回收率較低，僅能捕獲表達(dá)特定抗原的目標(biāo)外泌體，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，囊泡完整性影響較大。
綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)的方法提取到的外泌體，缺陷在于：收率較低，耗時(shí)長(zhǎng)、純度不高，外泌體囊泡不完整等。
6. 通用磁珠法利用磁珠表面基團(tuán)帶電特性結(jié)合外泌體膜結(jié)構(gòu)中的磷脂，磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。
優(yōu)點(diǎn)：效率和回收率較好、操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短、無(wú)設(shè)備限制。
缺點(diǎn)：純度一般，存在假陽(yáng)性，體液環(huán)境對(duì)外泌體與磁珠的結(jié)合影響較大，囊泡完整性影響較大。
綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)的方法提取到的外泌體，缺陷在于：收率較低、耗時(shí)長(zhǎng)、純度不高、外泌體囊泡不完整等。
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