磁珠法細(xì)胞分選的幾個考慮因素
FACS和磁性細(xì)胞分選比離心要特異得多，因為這些方法利用抗體來識別目標(biāo)細(xì)胞。利用FACS，細(xì)胞可根據(jù)幾個抗原的表達(dá)來分離。磁性分選則僅限于1-2個抗原，但優(yōu)點不少。它的平臺更為簡單，成本要低得多，并且處理時間也更短。也許你正躍躍欲試，那么，你需要考慮以下四個因素。
從復(fù)雜的細(xì)胞混合物中分離出特定的細(xì)胞，是研究人員經(jīng)常要面對的挑戰(zhàn)。就目前而言，三種應(yīng)用最廣泛的技術(shù)是：離心、熒光激活細(xì)胞分選（FACS）和磁性細(xì)胞分選。離心是最便宜的，但也最不特異，主要依靠細(xì)胞的物理特征（如密度）進(jìn)行分離，而基于表型分離細(xì)胞的能力有限。
FACS和磁性細(xì)胞分選比離心要特異得多，因為這些方法利用抗體來識別目標(biāo)細(xì)胞。利用FACS，細(xì)胞可根據(jù)幾個抗原的表達(dá)來分離。磁性分選則僅限于1-2個抗原，但優(yōu)點不少。它的平臺更為簡單，成本要低得多，并且處理時間也更短。也許你正躍躍欲試，那么，你需要考慮以下四個因素。
（1）樣品組成
若你了解樣品混合物的組成，則意味著實驗?zāi)軌蚝芎玫匾?guī)劃和開展。對于磁性細(xì)胞分選而言，這尤為重要，因為熟悉不同的細(xì)胞群體可幫你最大限度提高分離的純度和產(chǎn)量。比較兩個樣品的情況并不少見吧，比如，一個是對照，一個經(jīng)過處理。處理后的樣品可能有著不同比例的目標(biāo)細(xì)胞，這意味著你需要調(diào)整試劑，才能達(dá)到類似的純度。這同樣適用于標(biāo)志物上調(diào)或下調(diào)的情況。
（2）陽性分選還是陰性分選？
磁性細(xì)胞分選有兩種策略：陽性和陰性分選。簡單地說，陽性分選就是選出想要的，而陰性分選就是選出不想要的，留下想要的。這個選擇取決于你的特定需求，不過也需要考慮幾個因素：
作為FACS之前的富集步驟。在處理復(fù)雜的細(xì)胞群體時，一種有效的方法是先陽性選擇，再進(jìn)行FACS。例如，對于低頻率的目標(biāo)如小鼠樹突狀細(xì)胞（DC），你可以用CD11c結(jié)合的磁珠來富集整個DC部分，再通過FACS分選出CD8+和CD11+亞群。
功能研究。在開展陽性分選時，分離出的細(xì)胞攜帶了分選用的磁珠，除非二次處理才能去除。在大多數(shù)情況下，這都不是問題。不過，如果磁珠有阻斷或激活的性能，或者你已經(jīng)發(fā)現(xiàn)陽性選擇對你的實驗讀數(shù)有影響，那么陰性選擇可能更適合。
（3）計算純度和產(chǎn)量
在你分選出細(xì)胞之后，你可能需要驗證它的純度和產(chǎn)量。純度定義為收集到的目標(biāo)細(xì)胞的比例，可通過流式細(xì)胞儀來分析。產(chǎn)量則定義為回收到的目標(biāo)細(xì)胞相對于原始樣品中目標(biāo)細(xì)胞的比例。人們可能使用不同的方法來計算這一參數(shù)。有些人在將樣品放入磁場前后計算目標(biāo)細(xì)胞的數(shù)量，有些人則計算整個過程的產(chǎn)量。無論你使用哪種方法，它都報告為分選后目標(biāo)細(xì)胞的數(shù)量/分選前目標(biāo)細(xì)胞的數(shù)量。切記，不要使用細(xì)胞總數(shù)作為分母。
（4）尋找純度和產(chǎn)量之間的最佳平衡點
磁性分選的本質(zhì)是在純度和產(chǎn)量之間尋找一個最佳的平衡點。當(dāng)你提高純度，產(chǎn)量就會下降，反之亦然。對于陽性分選，若希望最大限度提高純度，你可以減少磁珠的量，或增加分離次數(shù)。若希望提高產(chǎn)量，則增加磁珠的量，或減少分離次數(shù)。
當(dāng)然，細(xì)胞分選實驗還是頗有挑戰(zhàn)性的，希望這里討論的tips能幫助你獲得最佳的結(jié)果。
（作者：BioLegend公司產(chǎn)品經(jīng)理：Miguel A. Tam博士）
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