磁性微球代替?zhèn)鹘y(tǒng)瓊脂糖微球進行免疫沉淀實驗，快速高效
2018-8-29 16:17:30點擊：
免疫沉淀（immunoprecipitation，IP，如圖）是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的agarose或Sepharose珠子孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物，沉淀經過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
傳統(tǒng)的瓊脂糖微球是多孔的，這使得它們具有高的表面積與蛋白質相互接觸，并可以容納大量的液體。在純化大量蛋白的時候，傳統(tǒng)的瓊脂糖微球是完美的選擇。免疫沉淀（IP）-利用結合在微球上的抗體將溶液中的目標蛋白質拉下來。過去，我們很自然地使用瓊脂糖微球，因為這是我們的習慣。但對IP來說，多孔的結構會帶來如下問題：
2）免疫沉淀的洗滌是在微量離心管中進行的，液體之間的交換通過移液槍來完成，很容易丟失樣品。
3）微球上的抗體與目標蛋白接觸的慢，需要長的孵育時間。
4）長的孵育時間及大量的洗滌導致目標蛋白的機械及生物（蛋白酶水解）損失。
所有這些變化意味實驗結果可能并不能如我們所愿進行復制。
現(xiàn)在，科學家在IP實驗中，更傾向于使用磁性微球，而不是瓊脂糖微球。因為磁性微球能夠解決上述的所有問題。磁性微球不是多孔的，有磁性，這意味著：
2）微球上的抗體與目標蛋白很快接觸，孵育時間減少。
3）少的洗滌次數(shù)及快的孵育時間意味著目標蛋白被蛋白酶水解的機會減少。
4）磁力架快速分離沉淀和上清液，從而降低了丟失樣品的機會。節(jié)約了操作時間，使操作更自動化。
操作中變量的減少使得實驗很容易再復制。
因此，大膽的嘗試采用瓊脂糖磁珠進行免疫共沉淀實驗吧！
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