【產(chǎn)品介紹】
磁珠法細菌基因組DNA提取試劑盒是普睿邁格生物科技有限公司最新研制的一種細菌基因組DNA提取試劑盒。本產(chǎn)品采用Lysis Buffer和Proteinase K裂解細菌細胞，釋放出基因組DNA，在結(jié)合液的作用下磁珠選擇性的吸附裂解液中的基因組DNA。通過洗滌液的清洗完全除去磁珠吸附的少量雜質(zhì)。在Elution Buffer的作用下Purimag Beads釋放吸附的基因組DNA，即獲得高質(zhì)量的基因組DNA。從1ml的菌液中可以獲得10~20 μg DNA，OD260/OD280比值一般為1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游實驗。適用于手工細菌基因組DNA的提取，可配合各類磁棒式核酸提取儀或自動化/半自動化工作站。
【特點】
l 耗時少：細菌DNA提取周期在50分鐘左右；
l 操作簡便：提取過程無需離心；
l 無毒無害：試劑中不含有氯仿，酚等有毒物質(zhì)；
l 效果穩(wěn)定：OD260/OD280穩(wěn)定在1.7-2.0之間，獲得細菌基因組DNA的純度更高；
l 自動化：可以同時處理多個樣品，實現(xiàn)細菌基因組提取的高通量化和自動化。
【保存方法及注意事項】
請將試劑盒中的PuriMag Beads、Proteinase K和RNase A置于2-8℃保存，其余試劑室溫保存，有效期詳見包裝。
l 嚴禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會對磁珠造成不可逆的損害。
l 磁珠長期放置后會聚集成團，從而使磁珠表面積減小，降低樣品回收得率，使用前一定要渦旋振蕩徹底混勻磁珠（通常需渦旋振蕩20秒）。
【試劑盒組成】
組分
100次
保存
Lysis buffer
20 ml
常溫
Binding buffer
18ml
Wash buffer
75%乙醇（用戶自備）
Elution buffer
10 ml
PuriMag bead
2 ml
2-8℃
RNase A
蛋白酶K
1 ml
溶菌酶
2 ml（選配試劑）
異丙醇
用戶自備
DNA濃度及純度檢測 ：（1）得到的基因組DNA片段大小與樣品保存時間、操作過程中剪切力等因素有關(guān)，所得DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度和純度。 （2）DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260=1相當于大約50ng/ul雙鏈DNA，40ng/ul單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7~1.9，如果洗脫時使用去離子水，比值會偏低，因為pH和離子會影響吸光度，并不表示純度低。
【操作步驟】
分菌→
1) 牙簽挑取平板菌落（1 mm）或取過夜培養(yǎng)細菌1 ml（細胞數(shù)為108-109）加入1.5 ml離心管。9000 rpm離心1 min，棄上清。（可選步驟：對于革蘭氏陽性菌，加入200 ul溶菌酶溶液重懸菌體，37 ℃水浴30~60 min。對細胞壁較厚的革蘭氏陽性菌，如金黃色葡萄球菌，可補加溶葡球菌酶助破壁。離心后備用。）
裂解→
2) 加入200 ul Lysis buffer搖勻，漩渦振蕩混勻，室溫溫育10分鐘至溶液變粘稠；加入10 ul蛋白酶K，漩渦振蕩器混勻，56 ℃消化30 min。（可選步驟：若革蘭氏陽性菌溶液渾濁未消化完全，可12000 rpm離心2min后取上清使用。）
除RNA→
3) 加入20 ul的 RNase A, 漩渦振蕩混勻，室溫溫育10分鐘以除去RNA。
除蛋白→
4) 向離心管中加入180 ul Binding buffer，漩渦振蕩1-2 s。
結(jié)合→
5) 取400 ul試樣加入磁珠懸液中（20 ul的 PuriMag bead和280 ul的異丙醇在一個新離心管中先預(yù)混），靜置5分鐘后，于磁力架上磁分離20 s，去上清。
洗滌→
6) 向離心管加入700 ul Wash buffer，移液槍緩慢吹打混勻，磁力架上靜置20 s，小心吸棄上清（重復(fù)該步驟2次）。倒置離心管2-3 min，室溫晾干5 min，讓殘留乙醇揮發(fā)干凈，以免影響后續(xù)實驗。
洗脫→
7) 向離心管加入50~100 ul Elution buffer，緩慢吹打混勻1~2 min。（Elution buffer在65~70 ℃中預(yù)熱后洗脫效果更好，減小洗脫體積或多次洗脫可增大DNA濃度）離心管磁力架上靜置0.5 min，小心吸走上清放入新離心管即為提取的DNA，存放于2-8 ℃，長期存放需置于-20 ℃。
提示：本試劑盒僅限科研用途。
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